Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒（去垢劑兼容型）

Bradford Protein Assay Kit（Detergent Compatible）

● 試劑盒內(nèi)容及保存：

● 儲(chǔ)存條件和效期：

考馬斯亮藍(lán)G-250染色液（去垢劑兼容型）4℃貯存；牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年。試劑盒常溫運(yùn)輸。

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(去垢劑兼容型)其原理是考馬斯亮藍(lán)G-250在酸性條件下和蛋白質(zhì)結(jié)合，使得染料最大吸收峰從465nm變?yōu)?95nm，在一定的線性范圍內(nèi)，反應(yīng)液595nm處吸光度的變化量與反應(yīng)蛋白量成正比，測(cè)定595nm處吸光度的增加即可進(jìn)行蛋白定量。該試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，能兼容一系列常見(jiàn)去垢劑和一定濃度的還原劑，并且檢測(cè)數(shù)據(jù)有很好的線性關(guān)系。本試劑盒的性能不僅優(yōu)于常規(guī)的Bradford法，和BCA法相比也更加快速便捷。

蛋白研究中許多蛋白樣品都是含有去垢劑，因此常規(guī)Bradford法的使用受到了很大的限制，通常只能使用可以兼容去垢劑但檢測(cè)比較耗時(shí)的BCA法。但BCA法無(wú)法兼容還原劑。當(dāng)?shù)鞍讟悠分型瑫r(shí)含有一定濃度的去垢劑和還原劑時(shí)，常規(guī)的Bradford法和BCA法都無(wú)法使用，而本試劑盒仍然是可以檢測(cè)的。試劑盒兼容蛋白提取的多種裂解液，包括 Western及IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。

按照每個(gè)10 μl樣品使用300 μl染色染色液計(jì)算，試劑盒可以至少檢測(cè)800個(gè)樣品。

● 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 檢測(cè)速度快，10-20個(gè)樣品只需不足10分鐘即可完成。

2. 靈敏度高，檢測(cè)濃度下限可達(dá)25 μg/ml （測(cè)定濃度范圍在50-1000 μg/ml內(nèi)有較好的線性關(guān)系），最小檢測(cè)蛋白量可達(dá)0.5 μg。

3. 該試劑盒測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá)1 M，DTT的濃度可高達(dá)5 mM。同時(shí)，此方法測(cè)定蛋白濃度可以兼容受高濃度的去垢劑影響，可以適用于膜蛋白樣品的濃度測(cè)定。蛋白樣品中SDS濃度低于1%，Triton X-100濃度低于1%，Tween 20, 60, 80濃度低于1%，NP-40濃度低于1%都可以定量。

● 操作方法：

用前注意事項(xiàng)：

蛋白標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)全部溶解混勻后再使用。

需可檢測(cè)560-610 nm之間波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀一臺(tái)，最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為595 nm。并需96孔微孔板。

微孔板測(cè)定程序：（最佳工作范圍50-1000 μg/ml）

1． G-250染液在使用前應(yīng)平衡溫度至常溫并溫和顛倒混勻。

2． 1 mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制：常溫完全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取20 μl 5 mg/ml BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入80 μl PBS溶液，使其終濃度為1 mg/ml。

3． 按照下表配制BSA標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液：

4． 取10 μl不同濃度蛋白標(biāo)準(zhǔn)加到96孔微孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中。

5． 將適當(dāng)體積的待測(cè)樣品加入到微孔板中，如果樣品不足10 μl，用PBS補(bǔ)足到10 μl；

6． 向微孔板中加入300 μl G-250染色液，混勻，常溫放置 3-5 min。

7． 用酶標(biāo)儀測(cè)定A₅₉₅波長(zhǎng)的吸光度，以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對(duì)照?？梢粤⒓礈y(cè)定吸光度，也可以在30分鐘內(nèi)測(cè)定，30分鐘內(nèi)檢測(cè)數(shù)據(jù)無(wú)顯著變化。對(duì)于不含去垢劑和含有某些去垢劑的情況，在2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)數(shù)據(jù)無(wú)顯著變化；對(duì)于含有某些特定去垢劑的情況，在2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)數(shù)據(jù)會(huì)有一定的變化，但仍然會(huì)呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。

8． 以A₅₉₅為縱坐標(biāo)，BSA含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，請(qǐng)稀釋樣品后重新測(cè)定。

注：如使用分光光度計(jì)測(cè)定，可根據(jù)實(shí)際需要擴(kuò)大溶液體積，保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和蛋白樣品與 G-250染液的體積比為 10:300，例如，如果需要 1.5 ml，可取蛋白樣品 50 μl，G-250染液試劑 1.5 ml。

 試劑盒對(duì)常見(jiàn)去垢劑的兼容性